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            非洲豬瘟現狀及檢測方法簡介
            發布時間:2019-07-12   點擊次數:7048次

            非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。臨床上以豬高熱、食欲廢絕、皮膚發紺、內臟實質、器官出血、呼吸系統和神經系統功能紊亂為主要特征。被世界動物衛生組織(OIE)列為必須報告的動物疫病,在我國倍列為一類動物疫病。該病病程極短,死亡率極高,已對發病國家的養豬業造成災難性打擊。

            2018年7月,遼寧省沈陽市發生*非洲豬瘟疫情,截止2019年上半年,全國共發生非洲豬瘟疫情100余起,包括25個省份(安徽、貴州、河南、黑龍江、湖北、湖南、吉林、江蘇、遼寧、內蒙古、山西、陜西、天津、云南、浙江、重慶、江西、福建、四川、上海、北京、青海、廣東、甘肅、寧夏),非洲豬瘟對我國養豬業的危害日益嚴峻。

            ASFV是非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬的WEI一成員,病毒基因組全長170~ 190 kb ,為有囊膜的雙股線狀DNA病毒,病毒粒子大小為175~215 nm,呈正二十面體結構。該病毒可使各種日齡和品種的家豬與野豬感染并發病,病毒可在多數蜱種中增殖,使蜱成為病毒的貯藏宿主和主要傳播媒介。該病毒早于1921年在非洲東部肯尼亞被發現,隨后開始在撒哈拉以南的非洲東部、中部、南部等地區蔓延。1957 年病毒從非洲的安哥拉傳到歐洲的西班牙,病毒開始在歐洲呈零星、持續流行。1971 年病毒從西班牙傳入南美洲的古巴,南美洲和拉丁美洲的多數國家陸續暴發疫情。2007年病毒傳入歐亞接壤的高加索地區,隨后開始向俄羅斯南部地區擴散流行,2017年傳播至俄羅斯遠東地區伊爾庫茨克,導致傳入我國的風險升高。2018年7月末,遼寧省沈陽市一養豬戶飼養的豬陸續發生不明原因死亡,病死豬剖檢發現脾臟異常腫大,疑似非洲豬瘟病毒感染,經國家外來動物疫病研究中心檢測,確診為非洲豬瘟病毒核酸陽性,通過序列分析發現引起該疫情的非洲豬瘟病毒B646L/p72基因序列與俄羅斯毒株100%匹配,與俄羅斯和東歐目前流行的格魯吉亞毒株( Georgia 2007 )屬于同-進化分支,這是我國發現的*非洲豬瘟,目前階段,面對非洲豬瘟還是以防疫銷毀為主。那么問題來了,當豬類養殖戶或者豬肉產品加工企業應該如何檢測非洲豬瘟?依據哪些國家標準來進行檢測呢?

            有關非洲豬瘟的檢測標準主要有:

             GB/T 18648-2002 《非洲豬瘟診斷技術》 、 

            SN/T 1559-2010  《非洲豬瘟檢疫技術規范》、 

            SZDB/Z131-2015《非洲豬瘟病毒抗體檢測阻斷酶聯免疫吸附法》 、 

            T/CVMA 5-2018 《非洲豬瘟病毒實時熒光 PCR 檢測方法》 等。

            這其中 GB/T 18648-2002 《非洲豬瘟診斷技術》制定時,我國還尚未發現非洲豬瘟,所以只介紹了聚合酶鏈式反應試驗(PCR)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)兩種試驗方法。更多具體檢測試驗方法可以依據SN/T 1559-2010  《非洲豬瘟檢疫技術規范》來進行。其次,有關非洲豬瘟病毒鑒定檢測的試驗主要病毒紅細胞吸附試驗(HAD)、病毒熒光抗體試驗(FAT)、聚合酶鏈式反應試驗(PCR)、基因組Taqman探針熒光PCR試驗、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、間接熒光抗體試驗(IFAT)、免疫印跡試驗等。

            下面對主要的幾種檢測方法做一個簡單的介紹

            1. 膠體金試紙檢測方法

            膠體金試紙檢測方法是以膠體金作為示蹤標志物,利用層忻技術實現抗原抗體特異性檢測的一種新型的免疫檢測技術。該方法具有快速、靈敏、特異等優點,該方法操作簡單,無需儀器設備,直接采血滴加到試紙條上20分鐘即可查看結果,尤其適合臨床的快速診斷,但該方法的敏感性較高,易出現假陽性。

            2.PCR

            PCR方法操作簡單、檢測快速,是目前簡單的分子生物學檢測技木,但該方法的敏感性有限,且擴增后電泳檢測需要使用溴化乙錠,具有一定的毒性。PCR檢測方法具有很好的實用性,檢測結果準確率較高,可以有效地應用于ASF的診斷以及防控。

            3. 熒光定量PCR方法

            實時熒光定量PCR方法是將光譜技術引入到PCR反應中,通過熒光信號的強弱變化定量測定特異性擴增產物的量,解決了常規PCR方法敏感性低和電泳檢測中溴化乙錠對環境的污染問題。熒光定量PCR方法敏感性高、特異性強,已逐步成為ASFV的臨床診斷、檢疫、食品安全檢驗的重要方法。

             

            4. ELISA方法

                 ELISA方法高通量、檢測快速、操作簡單,是目前常用的免疫學診斷技術,可用于豬群中ASFV感染的大規模調查。該方法具有敏感性高、重復性好、特異性強、準確性高等特點。但作為血清學檢測技術該方法具有一定的滯后性,無法對ASFV的早期感染做出診斷。

            在我國的《國家中長期動物疫病防治規劃( 2012-2020)》中,ASF被列為優先防范的13種重大外來動物疫病之一,且我國已發生* ASF疫情,該病但在我國廣泛流行,將給我國養豬業及養豬相關產業造成巨大沖擊。目前應加強流行病學調直和主動監測排查工作,保持高度警惕,防止該病在我國的進一步流行。

            本文簡單介紹了ASF各種診斷技術方法的優缺點,綜合比較來看,目前熒光定量PCR法是效果較好,污染較小的檢測方法,廣泛適用于養殖場、屠宰場、畜牧、疾控、食品企業、檢測機構等領域,是非洲豬瘟防控的優選檢測方法。

             

             

            熒光定量PCR非洲豬瘟檢測 配置方案

            序號

            名稱

            規格型號

            單位

            數量

            備注

            1

            便攜式實時熒光定量PCR儀

            16孔   雙通道

            1

            核心部件全進口

             

             

            選配配件

            序號

            名稱

            規格型號

            單位

            數量

            備注

            1

            迷你離心機

             

            1

            實驗所需儀器

            2

            移液器

            10μL

            1

            實驗所需儀器

            3

            移液器

            200μL

            1

            實驗所需儀器

            4

            旋渦震蕩儀

             

            1

            實驗所需儀器

            5

            U

            16G

            1

            數據儲存

            6

            非洲豬瘟熒光檢測PCR試劑盒

             

            1

             

            7

            PCR八連管

             

            30

            實驗所需耗材

            8

            10μL吸頭

            96支/盒

            1

            實驗所需耗材

            9

            200μL吸頭

            96支/盒

            1

            實驗所需耗材

            10

            1.5mL離心管

             

            200

            實驗所需耗材

            11

            乳膠手套

             

            30

            個人防護

            12

            1.5mL離心管架

            60

            1

            實驗所需耗材

            13

            PCR管架

            96

            1

            實驗所需耗材

            14

            醫用口罩

             

            10

            個人防護

            15

            記號筆

            黑色

            1

            樣本標記編號

            16

            計時器

             

            1

            實驗計時

            17

            冰盒

            藍色

            1

            樣品保存用

            18

            實驗用剪刀

             

            1

            實驗用

             

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